Sam50 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404298

Visão geral

SAMM50 codifica a Sam50, um componente central do complexo de triagem e montagem (SAM) na membrana externa mitocondrial, que promove a inserção e a montagem de proteínas β-barril e dá suporte à organização das cristas por meio de interações com a rede MICOS. Ao manter a arquitetura da membrana mitocondrial e a proteostase, a Sam50 influencia a capacidade de fosforilação oxidativa, a dinâmica mitocondrial e a sinalização responsiva ao estresse ligada ao metabolismo energético. A disrupção de SAMM50 está associada a fenótipos de disfunção mitocondrial e tem sido relacionada na literatura a características metabólicas e ao estresse celular ligado à neurodegeneração, o que a torna relevante para estudos mecanísticos de controle de qualidade de organelas. SAMM50 também é usado como um nó para investigar como defeitos na biogênese de proteínas da membrana externa afetam a suscetibilidade à apoptose e a sinalização imune inata desencadeada por perturbações mitocondriais.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Sam50 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene SAMM50 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do SAMM50, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do SAMM50 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Sam50.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de SAMM50 para a investigação da sinalização de Sam50, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) SAMM50 críticos para a função Sam50
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos SAMM50 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Sam50 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Sam50 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus SAMM50. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Sam50 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Sam50 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia SAMM50 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo SAMM50 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.