SAK/STK18/PLK4 Double Nickaseプラスミド (m): sc-423195-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- SAK/STK18/PLK4 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- SAK/STK18/PLK4ダブルニカースプラスミド（m）およびSAK/STK18/PLK4ダブルニカースプラスミド（m2）は、Plk4を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
SAK/STK18/PLK4 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-423195-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SAK/STK18/PLK4 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-423195-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
マウスPlk4は、SAK/STK18/PLK4としても知られるセリン／スレオニンキナーゼをコードしており、中心小体の新生（生合成）および中心体複製のマスター制御因子として機能します。PLK4活性は、中心小体組み立て因子のリクルートとリン酸化を協調的に制御し、中心体周期を細胞周期の進行および有糸分裂紡錘体の形成・配置と結び付けます。PLK4の量が適切に制御されないと、中心小体の過剰複製、余剰中心体、染色体不安定性を引き起こし得ます。これらの過程は、異数性、腫瘍形成、神経発生表現型のモデルにおいて頻繁に研究されています。中心体におけるシグナル伝達ハブとして、PLK4は有糸分裂の忠実性、チェックポイント制御、微小管依存的な細胞内構造の組織化を司る経路で一般的に解析対象となります。
SAK/STK18/PLK4 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Plk4 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Plk4内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Plk4の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Plk4が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。