S3-12 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409516-ACT

Il gene umano **PLIN4** codifica la proteina **S3-12** associata alle goccioline lipidiche, un membro della famiglia delle perilipine che funge da impalcatura per gli organelli di deposito dei lipidi neutri e coordina la biogenesi e il rimodellamento delle goccioline lipidiche. S3-12 partecipa alla differenziazione degli adipociti e alla gestione dei lipidi regolando l’accesso delle lipasi e dei fattori di traffico alla superficie della gocciolina, influenzando così il flusso degli acidi grassi, l’equilibrio energetico cellulare e l’adattamento metabolico. L’espressione di **PLIN4** è arricchita nel tessuto adiposo e nel muscolo ed è comunemente studiata in vie legate alla sensibilità all’insulina, allo stress lipotossico e alla segnalazione infiammatoria secondaria a un’alterata conservazione dei lipidi. Una dinamica delle perilipine deregolata, inclusi cambiamenti nei livelli di PLIN4/S3-12, è stata associata a fenotipi di malattia metabolica e ad accumulo lipidico tessuto-specifico, rendendola rilevante per studi meccanicistici sulla biologia dell’obesità e cardiometabolica.

S3-12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PLIN4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

S3-12 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PLIN4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PLIN4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di S3-12. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PLIN4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da S3-12 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via S3-12 nelle cellule tumorali con espressione di PLIN4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.