S-100 α chain CRISPR Activation Plasmid (h): sc-402065-ACT

S100A1 kodiert die S-100-α-Kette, ein kalziumbindendes EF-Hand-Protein, das als Signalvermittler fungiert und die intrazelluläre Ca2+-Dynamik mit Netzwerken von Protein-Protein-Interaktionen verknüpft. In menschlichen Zellen ist S100A1 an der Regulation der Zytoskelettorganisation, der Zellbeweglichkeit und stressantwortlicher Signalwege beteiligt und beeinflusst über kalziumabhängige Mechanismen Prozesse wie Myogenese, mitochondriale Funktion und die Erregungs-Kontraktions-Kopplung. Eine veränderte S100A1-Expression wurde in mehreren pathologischen Kontexten beschrieben, darunter kardiovaskuläre Funktionsstörungen, neuromuskuläres Remodeling und Krebserkrankungen, bei denen sie Programme der Proliferation, Invasion und Differenzierung beeinflussen kann. Als molekularer Indikator kalziumabhängiger Signalzustände wird S100A1 häufig in der Pathway-Kartierung und in mechanistischen Modellen der gewebespezifischen Homöostase sowie des krankheitsassoziierten Remodelings untersucht.

S-100 α chain Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen S100A1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

S-100 α chain Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des S100A1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der S100A1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen S-100 α chain-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native S100A1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von S-100 α chain-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des S-100 α chain-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem S100A1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.