RTP4 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-426736

Panoramica

La proteina trasportatrice dei recettori 4 (RTP4) è un membro della famiglia RTP implicato nel traffico intracellulare e nell’espressione funzionale di specifici recettori accoppiati a proteine G (GPCR), influenzandone la maturazione, la localizzazione di membrana e la responsività del segnale. Nel topo, l’espressione di Rtp4 è comunemente associata a programmi genici stimolati dall’interferone e alla segnalazione dell’immunità innata, collegandola alla regolazione delle risposte antivirali e di stati trascrizionali infiammatori. Attraverso effetti sul processamento dei recettori e su vie associate all’immunità, RTP4 può modellare le risposte cellulari a segnali extracellulari e agli ambienti citochinici. La deregolazione della segnalazione correlata a RTP4 e l’attivazione delle vie dell’interferone sono frequentemente studiate in contesti quali le interazioni neuro-immuni, i modelli di infezione e i fenotipi associati all’infiammazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RTP4 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rtp4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rtp4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rtp4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RTP4.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rtp4 per lo studio della segnalazione di RTP4, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rtp4 critici per la funzione di RTP4
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rtp4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RTP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RTP4 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rtp4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RTP4 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RTP4 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rtp4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rtp4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.