ROS-GC1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-404483
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- ROS-GC1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico ROS-GC1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:ROS-GC1 Anticorpo (B-7): sc-376217
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
ROS-GC1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-404483 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
GUCY2D codifica a ROS-GC1, uma guanilato ciclase receptora ligada à membrana que sintetiza cGMP em resposta a sinais intracelulares de Ca2+ mediados por proteínas ativadoras de guanilato ciclase. Nos fotorreceptores da retina, a ROS-GC1 sustenta a recuperação e a adaptação ao restabelecer os níveis de cGMP que controlam a atividade de canais regulados por nucleotídeos cíclicos dentro da cascata de fototransdução. Essa enzima integra a homeostase de cálcio à sinalização por segundos mensageiros para ajustar a excitabilidade da membrana e a saída sináptica. A desregulação ou variantes patogênicas em GUCY2D estão associadas a distúrbios retinianos hereditários, tornando-o um alvo importante para estudos mecanísticos da sinalização por cGMP e da função de neurônios sensoriais.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO ROS-GC1 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene GUCY2D em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do GUCY2D, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do GUCY2D na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína ROS-GC1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de GUCY2D para a investigação da sinalização de ROS-GC1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) GUCY2D críticos para a função ROS-GC1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos GUCY2D para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo ROS-GC1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo ROS-GC1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus GUCY2D. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo ROS-GC1 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR ROS-GC1 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia GUCY2D para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo GUCY2D definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.