Rock-2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400468-ACT

ROCK2（Rho-associated coiled-coil containing protein kinase 2）は、アクチン–ミオシン収縮性の制御においてRhoAの主要なエフェクターとして機能するセリン/スレオニンキナーゼであるRock-2をコードする。Rock-2はミオシン軽鎖やLIMキナーゼなどの基質をリン酸化し、ストレスファイバー形成、接着斑（focal adhesion）の動態、細胞極性、細胞質分裂を制御することで、細胞移動および組織構築を形成する。これらの細胞骨格出力を介して、ROCK2はメカノトランスダクション、細胞外マトリックス（ECM）リモデリング、ならびに血管内皮および平滑筋の緊張に関連する経路にまたがるシグナルを統合する。ROCK2シグナルの異常は、浸潤性の変化、血管機能障害、炎症応答、線維化関連プロセスと関連づけられており、細胞骨格駆動性の疾患表現型を解析するための標的（ノード）として広く用いられている。

Rock-2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ROCK2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rock-2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ROCK2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はROCK2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rock-2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のROCK2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRock-2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびROCK2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRock-2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。