robo4 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401856-ACT

ROBO4（ラウンドアバウト・ガイダンス受容体4）は、主に血管内皮で発現する膜貫通型受容体をコードしており、血管の安定性維持を助け、血管新生に関わる挙動を調節します。Robo4は、SLITシグナルとのクロストークや、VEGFによる透過性亢進に関連する経路を含むガイダンス／接着シグナルに影響することで、細胞骨格ダイナミクスおよび内皮バリア機能を調節します。これらの機構を通じて、ROBO4は血管芽形成、血管炎症、微小血管における白血球トラフィッキングなどの過程に広く関与します。ROBO4の発現またはシグナル伝達の破綻は、病的血管新生や血管インテグリティの変化と関連しており、多様な心血管系および腫瘍関連の血管表現型で観察されています。

robo4 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ROBO4の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

robo4 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ROBO4 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はROBO4転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性robo4の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のROBO4遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるrobo4依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびROBO4発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるrobo4経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。