RNGTT CRISPR Activationプラスミド (h): sc-405280-ACT

ヒトRNGTTは、mRNAの5′キャッピングにおける主要な段階を触媒するRNAグアニリルトランスフェラーゼおよび5′-ホスファターゼをコードしており、転写直後のRNA 5′三リン酸末端を、メチルトランスフェラーゼや転写装置と協調してm7Gキャップへと変換する。このキャップ構造は、pre-mRNAのプロセシング、核外輸送、翻訳開始、ならびにエキソヌクレアーゼからの保護に必須であり、RNGTTの活性をRNAポリメラーゼIIに共役した転写および全体的な遺伝子発現プログラムと結び付けている。mRNAの安定性や翻訳効率に影響を及ぼすことで、RNGTTは細胞周期進行、ストレス応答、キャップのないRNAに対する自然免疫のセンシングを制御する経路とも交差する。mRNAキャッピングの破綻やキャップ依存的翻訳制御の異常は、増殖性疾患や神経発達疾患の病態生物学と広く関連しており、RNGTTはRNA代謝の機構研究に有用な標的（ノード）となる。

RNGTT CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RNGTTの発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

RNGTT CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RNGTT 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRNGTT転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性RNGTTの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRNGTT遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRNGTT依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRNGTT発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRNGTT経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。