RNF8 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-401909-NIC

RNF8 codifica uma ligase E3 de ubiquitina que atua como um fator precoce de sinalização na cromatina durante a resposta a danos no DNA, catalisando a ubiquitinação em locais de quebras de dupla fita para promover o recrutamento de mediadores de reparo a jusante. Em coordenação com eventos de fosforilação dependentes de ATM e com cascatas de sinalização por ubiquitina, a RNF8 ajuda a organizar a escolha da via de reparo e dá suporte à recombinação homóloga e ao reparo por junção de extremidades não homólogas (NHEJ), de maneira dependente do contexto. A atividade de RNF8 contribui para a manutenção da estabilidade do genoma, a regulação de checkpoints do ciclo celular e o remodelamento da cromatina em regiões de DNA danificado. A perturbação da sinalização por ubiquitina dependente de RNF8 é frequentemente estudada em modelos de instabilidade genômica e de defeitos de reparo do DNA associados ao câncer.

RNF8 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus RNF8 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de RNF8. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função RNF8. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.

Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com RNF8 interrompido.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.