RNF157 Double Nickase Plasmid (h): sc-407283-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das RNF157 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- RNF157 Double-Nickase-Plasmid (h) und RNF157 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf RNF157 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
RNF157 Double Nickase Plasmid (h) | sc-407283-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RNF157 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-407283-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
RNF157 kodiert eine RING-Finger-E3-Ubiquitin-Ligase, die zum ubiquitinabhängigen Proteinabbau und zur Kontrolle zellulärer Signalwege in menschlichen Zellen beiträgt. Über seine katalytische Funktion bei der Ubiquitinierung kann RNF157 die Proteostase, Stressantworten und Entscheidungen über das Zellschicksal beeinflussen, indem es Stabilität und Aktivität nachgeschalteter Substrate moduliert. E3-Ligasen wie RNF157 sind in Signalwege eingebunden, die die neuronale Aufrechterhaltung sowie apoptosebezogene Prozesse steuern, wodurch RNF157 für Studien der Neurobiologie und zellulärer Überlebensmechanismen interessant ist. Eine veränderte Regulation des Ubiquitin-Systems, einschließlich der Fehlregulation von E3-Ligasen, wird häufig im Zusammenhang mit krebsassoziierter Signalübertragung, neurodegenerativen Mechanismen und anderen Erkrankungen untersucht, die mit einer gestörten Protein-Homöostase einhergehen.
RNF157 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des RNF157-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von RNF157 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die RNF157-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit RNF157-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.