RNase T2a CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-437175

概要

Rnaset2a は、リソソーム／分泌型リボヌクレアーゼである RNase T2a をコードしており、RNA の代謝回転（ターンオーバー）とヌクレオチド再利用に関与する、保存性の高い RNase T2 ファミリーの一員です。RNase T2a は、細胞外およびエンドリソソーム内の RNA 分解を促進することで細胞恒常性に寄与し、RNA 異化代謝をリソソーム機能、さらには広範なストレス応答や炎症シグナル伝達経路と結び付けています。マウスモデルでは、RNase T2 ファミリー活性の攪乱を用いて、異常な RNA の残存が自然免疫センサー、神経炎症、組織リモデリングにどのように影響するかを検討します。これらの過程は、核酸処理の破綻に伴うリソソーム蓄積症様の表現型や無菌性炎症の機序解明に関連します。

RNase T2a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるRnaset2a遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Rnaset2a内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Rnaset2aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、RNase T2aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、RNase T2aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Rnaset2a欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• RNase T2aの機能に不可欠なRnaset2aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Rnaset2aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• RNase T2a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびRNase T2a CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Rnaset2a遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  RNase T2a HDRプラスミド（m）および RNase T2a HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRnaset2aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRnaset2a標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。