RIN3 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-432255

Panoramica

Rin3 codifica RIN3, un interattore di Ras e Rab che funge da fattore di scambio dei nucleotidi della guanina (GEF) per le GTPasi della famiglia Rab5, collegando la segnalazione dei recettori tirosin-chinasici al traffico endocitico. Nelle cellule murine, RIN3 partecipa all’endocitosi mediata da clatrina, alla maturazione degli endosomi precoci e alla regolazione dell’internalizzazione e del riciclo dei recettori, processi che modellano ampiezza e durata della segnalazione a valle. Attraverso questi ruoli, Rin3 influenza la dinamica delle vescicole, il turnover di membrana e il coordinamento del citoscheletro durante gli stati di attivazione cellulare. Un’attività alterata di RIN3 è stata collegata a meccanismi rilevanti per la malattia che coinvolgono un traffico endosomiale deregolato e la segnalazione recettoriale, a supporto del suo studio in vie che contribuiscono a fenotipi infiammatori e neurodegenerativi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RIN3 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Rin3 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Rin3 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Rin3 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RIN3.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Rin3 per lo studio della segnalazione di RIN3, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Rin3 critici per la funzione di RIN3
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Rin3 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RIN3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal RIN3 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Rin3. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RIN3 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR RIN3 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Rin3 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Rin3 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.