Rictor Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400710-ACT

RICTOR codifica o Rictor, um componente estrutural essencial do complexo mTOR 2 (mTORC2) que coordena a sinalização por quinases para regular a sobrevivência celular, a proliferação, o metabolismo e a organização do citoesqueleto. Por meio da fosforilação, dependente de mTORC2, de quinases da família AGC — incluindo AKT (Ser473), SGK e isoformas de PKC —, o Rictor contribui para o ajuste fino da via PI3K–AKT, da sinalização da insulina e da dinâmica da actina. Alterações na expressão de RICTOR ou na atividade do mTORC2 estão frequentemente associadas à desregulação da sinalização por fatores de crescimento e à reprogramação metabólica observadas em diversos contextos de câncer e doenças metabólicas. Como um nó central na detecção de nutrientes e de fatores de crescimento, o Rictor é amplamente estudado em mecanismos de resistência a fármacos, migração e diferenciação específica de linhagem.

Rictor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de RICTOR sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Rictor O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus RICTOR em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição RICTOR, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Rictor. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus RICTOR nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Rictor no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Rictor em células tumorais com expressão de RICTOR silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.