Riboflavin kinase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-418359

概要

ヒトRFKはリボフラビンキナーゼをコードしており、細胞質に存在する酵素としてリボフラビン（ビタミンB2）をリン酸化してフラビンモノヌクレオチド（FMN）へと変換し、フラビンアデニンジヌクレオチド（FAD）生合成に必要な主要前駆体を供給します。細胞内のFMN/FADの利用可能量を調節することで、RFKはフラボタンパク質依存性の酸化還元反応を支え、ミトコンドリアの酸化的代謝、抗酸化防御、さらにはより広範な細胞の生体エネルギー代謝に影響を与えます。リボフラビンの利用やフラビン補酵素の恒常性の乱れは、代謝機能障害や酸化ストレス関連の表現型と関連づけられており、RFKはビタミン依存性酵素学を研究する上で有用な結節点となります。そのためRFKの機能は、ヒト細胞モデルにおけるミトコンドリア過程、レドックスシグナル伝達、栄養素―補酵素制御の研究において重要です。

Riboflavin kinase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRFK遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RFK内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RFKのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Riboflavin kinaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Riboflavin kinaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RFK欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Riboflavin kinaseの機能に不可欠なRFKエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RFKゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Riboflavin kinase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRiboflavin kinase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RFK遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Riboflavin kinase HDRプラスミド（h）および Riboflavin kinase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRFKホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRFK標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。