Rho G CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-402608

概要

RHOGはRho Gをコードしており、Rhoファミリーに属する低分子GTPアーゼの一員として、受容体シグナル伝達をアクチン細胞骨格の再編成へとつなぐ分子スイッチとして機能します。Rho Gは、Rac1およびCdc42の活性に収束する経路を協調させ、インテグリン依存的な接着ダイナミクスを支えることで、膜ラッフリング、細胞の伸展、遊走を制御します。これらの過程を通じて、RHOGはエンドサイトーシス輸送や、貪食や抗原刺激に依存した応答といった免疫細胞機能にも影響を与えます。Rho Gシグナルの制御異常は、細胞骨格制御の変化が異常な細胞運動性や炎症性表現型に関与する状況で検討されており、がん細胞浸潤や免疫細胞の挙動に関する機序研究において重要です。

Rho G CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRHOG遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RHOG内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RHOGのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Rho Gタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Rho Gシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RHOG欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Rho Gの機能に不可欠なRHOGエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RHOGゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Rho G CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびRho G CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RHOG遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Rho G HDRプラスミド（h）および Rho G HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRHOGホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRHOG標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。