Plásmido Doble Nickase (h) Rho 8: sc-403363-NIC

RND3 codifica Rho 8 (también conocido como RhoE), una GTPasa atípica de la familia Rho que modula la organización del citoesqueleto de actina y la contractilidad celular, en gran medida al antagonizar la señalización RHOA–ROCK. Al influir en la formación de fibras de estrés, la dinámica de las adhesiones focales y la fosforilación de la cadena ligera de miosina, Rho 8 contribuye a la regulación de la migración celular, el crecimiento de neuritas y la progresión del ciclo celular. La actividad de RND3 se cruza con vías que controlan la adhesión y la supervivencia, incluidas las respuestas a factores de crecimiento y al estrés celular. La expresión o señalización alteradas de RND3 se han asociado con fenotipos relevantes para la invasión de células tumorales, el remodelado cardiovascular y procesos del neurodesarrollo, lo que lo convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos de la regulación del citoesqueleto y de la transcripción.

Rho 8 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus RND3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de RND3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de RND3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con RND3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.