RFXAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406793

Übersicht

RFXAP (regulatory factor X associated protein) ist ein essenzieller Kofaktor des RFX-Transkriptionskomplexes, der an das X-Box-Promotorelement bindet und so die Expression von MHC-Klasse-II-Genen antreibt. Über diese Funktion unterstützt RFXAP die Antigenverarbeitung und -präsentation und prägt die adaptive Immunaktivierung, indem es CIITA-abhängige Transkriptionsprogramme reguliert. Loss-of-Function-Varianten in RFXAP stören die MHC-Klasse-II-Expression und sind mit dem Bare-Lymphocyte-Syndrom Typ II assoziiert, das durch eine beeinträchtigte Immunüberwachung gekennzeichnet ist. In Modellsystemen beeinflusst eine Störung von RFXAP interferonresponsive Signalwege, die Differenzierung von Immunzellen und Mechanismen, die die Wirt–Pathogen-Interaktion steuern.

Das RFXAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des RFXAP-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des RFXAP-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von RFXAP nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die RFXAP-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von RFXAP-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der RFXAP-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf RFXAP-Exone abzielen, die für die RFXAP-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere RFXAP-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom RFXAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom RFXAP CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des RFXAP-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das RFXAP HDR-Plasmid (h) und RFXAP HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von RFXAP-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten RFXAP-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.