RFXAP Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406793

Panoramica

RFXAP (regulatory factor X associated protein) è un cofattore essenziale del complesso trascrizionale RFX, che si lega all’elemento promotore X-box per promuovere l’espressione dei geni dell’MHC di classe II. Attraverso questo ruolo, RFXAP sostiene l’elaborazione e la presentazione dell’antigene e modella l’attivazione dell’immunità adattativa regolando programmi trascrizionali dipendenti da CIITA. Varianti a perdita di funzione in RFXAP compromettono l’espressione dell’MHC di classe II e sono associate alla sindrome dei linfociti nudi (bare lymphocyte syndrome) di tipo II, caratterizzata da una ridotta sorveglianza immunitaria. Nei sistemi modello, l’alterazione di RFXAP influisce su vie di segnalazione responsabili all’interferone, sulla differenziazione delle cellule immunitarie e sui meccanismi che governano le interazioni ospite–patogeno.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO RFXAP (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RFXAP in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RFXAP insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RFXAP a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina RFXAP.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RFXAP per lo studio della segnalazione di RFXAP, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni RFXAP critici per la funzione di RFXAP
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RFXAP per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal RFXAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal RFXAP CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RFXAP. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal RFXAP Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR RFXAP (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RFXAP per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RFXAP definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.