Reg IV Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-404117-ACT

O gene humano REG4 codifica a proteína regeneradora derivada de ilhotas 4 (Reg IV), um membro secretado da família das lectinas do tipo C, implicado na diferenciação de células epiteliais, na defesa mucosa e na remodelação tecidual no trato gastrointestinal. A expressão de Reg IV está associada à modulação de programas de proliferação e sobrevivência, com ligações descritas a saídas de sinalização associadas a EGFR/ERK e PI3K/AKT em contextos epiteliais. A proteína é frequentemente estudada como um fator do tipo biomarcador na biologia do sistema digestivo e está associada a processos patológicos que acompanham o stress epitelial, a inflamação e a remodelação associada a tumores. Estas características tornam o REG4 um alvo útil para investigar a regulação transcricional, redes de sinalização mediadas por fatores secretados e fenótipos epiteliais relevantes para a doença.

Reg IV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de REG4 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Reg IV O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus REG4 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição REG4, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Reg IV. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus REG4 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Reg IV no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Reg IV em células tumorais com expressão de REG4 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.