RBM47 Double Nickaseプラスミド (m): sc-434185-NIC
- 対象生物種: mouse
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- RBM47 Double Nickaseプラスミド (m)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- RBM47ダブルニカースプラスミド（m）およびRBM47ダブルニカースプラスミド（m2）は、Rbm47を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
RBM47 Double Nickaseプラスミド (m) | sc-434185-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
RBM47 Double Nickaseプラスミド (m2) | sc-434185-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Rbm47 は、RNA 結合モチーフタンパク質 RBM47 をコードしており、特定の転写産物に結合して mRNA の安定性、局在、選択的スプライシングに影響を与える、転写後遺伝子発現の保存的な制御因子です。マウス細胞では、RBM47 は上皮分化やストレス応答性の転写出力を形作る RNA プロセシングプログラムに寄与し、スプライソソーム関連因子や RNA 監視機構を含む、より広範な RNA 代謝経路とも連携します。RBM47 の活性変化は、発生や上皮—間葉系の可塑性に関わる遺伝子発現ネットワークの破綻と関連づけられており、RNA 制御と細胞状態転換を結びつける機構を研究する上で有用な結節点となります。これらの特徴により、RBM47 は、RNA 結合タンパク質が正常生理および疾患関連の状況下でトランスクリプトーム再構築をどのように協調的に制御するかを解析するための、重要な標的として位置づけられます。
RBM47 ダブルニカースプラスミド（m）は、mouse 細胞株における Rbm47 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、Rbm47内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、Rbm47の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、Rbm47が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。