Rad52 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401948-ACT

ヒトRAD52はRad52というDNA修復因子をコードしており、二本鎖切断後にゲノムの完全性を回復するため、相同組換えおよび一本鎖アニーリングを促進します。Rad52は複製関連修復や、組換えを介した複製再開に関与し、DNA末端のリセクションやRAD51依存性プロセスと連携しながら、より広範なDNA損傷応答の中で機能します。その活性は、染色体安定性、組換えの帰結、ならびに遺伝毒性ストレスに対する細胞感受性に影響を与えます。RAD52の機能変化やRAD52への依存性は、複数のがん関連修復背景で見られるゲノム不安定性表現型や、相同組換えが障害されたモデルにおいて研究されています。

Rad52 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAD52の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rad52 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAD52 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAD52転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rad52の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAD52遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRad52依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAD52発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRad52経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。