Rac 2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-401157-NIC

RAC2はRac 2をコードしており、Rac 2は造血系細胞で高発現するRhoファミリーの低分子GTPアーゼです。GDP結合状態とGTP結合状態の間を周期的に切り替えることで、アクチン細胞骨格の再編成、細胞極性、方向性のある遊走を協調的に制御します。Rac 2は、ケモカイン受容体、インテグリン、Fc受容体の下流シグナルを統合し、PI3Kシグナル伝達やNADPHオキシダーゼの活性化などの経路を介して、貪食、脱顆粒、活性酸素種（ROS）産生を調節します。免疫細胞においてRac 2は、白血球のトラフィッキング、接着、抗菌応答に寄与し、その活性は炎症性シグナルプログラムと結び付いています。RAC2の機能や発現の破綻は、免疫不全、好中球／リンパ球の異常な挙動、ならびに細胞骨格ダイナミクスや酸化バーストが障害される血液疾患の機序に関する研究において重要です。

Rac 2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RAC2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RAC2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RAC2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RAC2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。