Rac 2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401157-ACT

RAC2はRac2をコードしており、Rac2は造血系細胞に豊富に発現するRhoファミリーの低分子GTPアーゼです。GDP結合型とGTP結合型の間を循環しながら、アクチン細胞骨格の再構築、細胞極性、膜輸送を協調的に制御します。Rac2は免疫受容体、インテグリン、ケモカインシグナルの下流で機能し、NADPHオキシダーゼの活性化、活性酸素種（ROS）産生、ならびに食細胞の抗菌応答を調節するとともに、MAPK依存性およびPI3K依存性のシグナル出力にも影響を与えます。白血球では、Rac2は走化性、接着、脱顆粒、免疫シナプスのダイナミクスを支え、細胞骨格制御を炎症および自然免疫の経路と結び付けます。RAC2の活性や発現の異常は宿主防御や免疫恒常性の変化と関連しており、免疫不全の機序、炎症性表現型、造血系細胞シグナル伝達を研究する上で重要です。

Rac 2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性RAC2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Rac 2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における RAC2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はRAC2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Rac 2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のRAC2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるRac 2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびRAC2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるRac 2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。