rabphilin-3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-404628

概要

RPH3Aは、ニューロンに豊富に発現するRab3A/Rab27エフェクターであるラブフィリン3A（rabphilin-3A）をコードし、Ca²⁺依存性シグナル伝達を制御された小胞エキソサイトーシスに結び付けます。低分子量GTPアーゼやシナプス小胞構成因子との相互作用を介して、ラブフィリン3Aは小胞のドッキング、プライミング、放出確率に寄与し、効率的な神経伝達物質分泌を支えます。その機能は、前シナプス膜のトラフィッキング経路や、⼩胞リサイクリングとシナプス可塑性を協調させる細胞骨格ダイナミクスとも交差します。RPH3Aが関与するシナプス小胞輸送および放出機構の破綻は、神経疾患・神経精神疾患の病態メカニズム研究において重要です。

rabphilin-3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるRPH3A遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、RPH3A内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、RPH3Aのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、rabphilin-3Aタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、rabphilin-3Aシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、RPH3A欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• rabphilin-3Aの機能に不可欠なRPH3Aエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、RPH3Aゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• rabphilin-3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびrabphilin-3A CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、RPH3A遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  rabphilin-3A HDRプラスミド（h）および rabphilin-3A HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはRPH3Aホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のRPH3A標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。