Plasmide CRISPR/Cas9 KO rabphilin-3A (h): sc-404628

Présentation

RPH3A code la rabphiline‑3A, un effecteur de Rab3A/Rab27 enrichi dans les neurones, qui couple la signalisation dépendante du Ca²⁺ à l’exocytose vésiculaire régulée. Grâce à ses interactions avec de petites GTPases et des composants des vésicules synaptiques, la rabphiline‑3A contribue à l’arrimage, à la maturation (priming) et à la probabilité de libération des vésicules, favorisant une sécrétion efficace des neurotransmetteurs. Son activité s’inscrit à l’interface des voies présynaptiques de trafic membranaire et de la dynamique du cytosquelette, qui coordonnent le recyclage des vésicules et la plasticité synaptique. La dérégulation du transport des vésicules synaptiques et de la machinerie de libération impliquant RPH3A est pertinente pour les études mécanistiques de la biologie des maladies neurologiques et neuropsychiatriques.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO rabphilin-3A (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène RPH3A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du RPH3A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert RPH3A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine rabphilin-3A.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en RPH3A pour l'étude de la signalisation de rabphilin-3A, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de RPH3A essentiels à la fonction de rabphilin-3A
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de RPH3A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le rabphilin-3A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le rabphilin-3A plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus RPH3A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le rabphilin-3A plasmide HDR (h) et le rabphilin-3A (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie RPH3A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles RPH3A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.