Rab 27b Double Nickaseプラスミド (h): sc-403498-NIC

RAB27Bは小型GTPアーゼであるRab 27bをコードしており、分泌顆粒やエクソソームが細胞膜でドッキングおよび融合する過程を協調的に制御する、小胞輸送の主要な調節因子です。Rab 27bはGDP結合型とGTP結合型の間を循環することで機能し、細胞骨格リモデリング、膜動態、制御性エキソサイトーシスに関与するエフェクターネットワークと相互作用します。ヒト細胞では、RAB27B依存的な輸送が、免疫・炎症シグナル伝達に関わる分泌プログラム、血小板や好中球の顆粒放出、ならびに細胞外小胞を介した腫瘍—間質コミュニケーションに影響を及ぼします。RAB27Bの発現や活性の異常は、がんの進行や転移挙動で観察される小胞分泌表現型の変化と関連づけられており、膜輸送研究における機構的ハブとしての有用性を支持しています。

Rab 27b ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における RAB27B 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、RAB27B内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、RAB27Bの機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、RAB27Bが破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。