QTRT1 Double Nickaseプラスミド (h): sc-413456-NIC
- 対象生物種: human
- 20 µg のトランスフェクション準備済み、精製したプラスミドDNA、～20回トランスフェクション
- QTRT1 Double Nickaseプラスミド (h)はペアのプラスミドを含みます。それぞれのプラスミドはD10A変異したCas9 nuclease、及びCRISPR/Cas9 KOの対応よりも高い特異性で遺伝子発現をノックアウトするように設計された標的特異的な20 ntガイドRNA (gRNA)をコードします。
- ペアリングしたガイドRNAは、約20 bpでずらすことにより、ゲノムDNAの特定Cas9媒介のdouble nickingを可能にし、DSBを模造します。
- ペアの1つのプラスミドは選択用のピューロマイシン耐性遺伝子を含みます；ペアのほかの1つのプラスミドは、視覚的にトランスフェクションを確認するGFPマーカーを含みます。
- QTRT1ダブルニカースプラスミド（h）およびQTRT1ダブルニカースプラスミド（h2）は、QTRT1を標的とする異なるペアのgRNA設計をコードしています。いずれか一方、あるいは両方のデザインが利用可能である場合があります
- トランスフェクションの後、遺伝子ノックアウト効果は、抗体を用いたWB、IFまたはIHCによって検定されることができます: QTRT1 抗体 (D-7): sc-398918
注文情報
| 製品名 | カタログ # | 単位 | 価格 | 数量 | お気に入り | |
QTRT1 Double Nickaseプラスミド (h) | sc-413456-NIC | 20 µg | $410.00 |
QTRT1は、tRNA-グアニン転移酵素（tRNA-guanine transglycosylase）の触媒サブユニットをコードしており、特定の細胞質tRNAのワブル位置（G34）にキューオシン（queuosine）を導入することで、コドン解読の忠実度や翻訳ダイナミクスを規定します。このtRNA修飾経路を介して、QTRT1はタンパク質合成の正確性と効率に影響を与え、プロテオスタシスおよび細胞のストレス適応に寄与します。QTRT1を含むtRNA修飾酵素の機能異常は、増殖やストレス応答の表現型に結び付く翻訳プログラムの変化と関連していることが示されており、本遺伝子はRNA生物学や代謝制御の研究において重要です。したがってQTRT1は、ワブル塩基修飾が翻訳レベルでの遺伝子発現にどのように影響するかを機構的に解明するための有用な標的です。
QTRT1 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における QTRT1 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、QTRT1内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、QTRT1の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。
編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、QTRT1が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。
研究用のみ。診断用または治療用ではありません。