pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-406810

概要

PDXPは、ビタミンB6の活性型であるピリドキサール5′-リン酸（PLP）を加水分解する細胞質酵素、ピリドキサールホスファターゼをコードしており、PLPの利用可能量の細胞内制御およびビタミンB6各形態（ビタマー）の恒常性維持に寄与します。PLPは多数のアミノ基転移酵素、脱炭酸酵素、ならびに一炭素代謝や神経伝達物質関連代謝に関わる酵素に必須の補因子であるため、PDXP活性はアミノ酸の代謝回転やより広範な代謝フラックスに間接的な影響を及ぼし得ます。補因子バランスの維持という役割を通じて、PDXPは代謝適応、酸化還元に連関した経路、ならびに酵素—補因子制御の研究において重要です。PLP依存性代謝の変調は多様な疾患関連の文脈で関与が示唆されていることから、PDXPは代謝に関連する細胞表現型の機序解明研究に有用な標的となります。

pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPDXP遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PDXP内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PDXPのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、pyridoxal phosphataseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、pyridoxal phosphataseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PDXP欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• pyridoxal phosphataseの機能に不可欠なPDXPエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PDXPゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• pyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびpyridoxal phosphatase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PDXP遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  pyridoxal phosphatase HDRプラスミド（h）および pyridoxal phosphatase HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPDXPホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPDXP標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。