PTP1B Lentiviral Activation Particles (h): sc-400732-LAC

PTPN1 kodiert die Protein-Tyrosinphosphatase 1B (PTP1B), eine mit dem endoplasmatischen Retikulum assoziierte Phosphatase, die aktivierte Rezeptor-Tyrosinkinasen und zentrale Signalintermediate dephosphoryliert. Durch die Abschwächung der Signalübertragung über den Insulinrezeptor und IGF1R moduliert PTP1B die Aktivität der PI3K–AKT- und MAPK-Signalwege und prägt damit den zellulären Stoffwechsel, die Reaktionsfähigkeit auf Wachstumsfaktoren und Stresssignale. PTP1B beeinflusst zudem Zytokin- sowie JAK/STAT-bezogene Signalwege, indem es ausgewählte Substrate dephosphoryliert, und verknüpft so den Phosphotyrosin-Umsatz mit entzündlichen und immunregulatorischen Prozessen. Eine dysregulierte PTPN1/PTP1B-Aktivität wurde mit metabolischen Phänotypen, einer krebsassoziierten Umprogrammierung von Signalwegen und veränderter Immun-Signalgebung in Verbindung gebracht, weshalb PTP1B häufig als zentraler Knotenpunkt zur Analyse von Signalwegen genutzt wird.

PTP1B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente PTPN1-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

PTP1B Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der PTPN1-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen PTP1B-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen PTPN1-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.