PSPH CRISPR/Cas9 KOプラスミド (h): sc-403897

概要

ホスホセリンホスファターゼ（PSPH）は、リン酸化セリン生合成経路の最終段階を触媒し、O-ホスホ-L-セリンをL-セリンと無機リン酸に変換する。細胞内セリンの利用可能量を制御することで、PSPHはワンカーボン代謝およびヌクレオチド合成、グルタチオン産生を介した酸化還元バランス、脂質合成を支え、アミノ酸代謝を増殖プログラムやストレス応答プログラムと結び付けている。PSPH活性は、急速に分裂する細胞で観察される代謝リプログラミングとも接点を持ち、セリン–グリシン軸においてPHGDHやPSAT1と併せて検討されることが多い。PSPHの発現異常は、がんをはじめ、アミノ酸代謝やワンカーボン代謝の破綻を特徴とする他の疾患における代謝表現型の変化と関連付けられており、代謝脆弱性の機序研究において重要である。

PSPH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）は、human細胞株におけるPSPH遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、PSPH内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、PSPHのオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、PSPHタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、PSPHシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、PSPH欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• PSPHの機能に不可欠なPSPHエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、PSPHゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• PSPH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h）およびPSPH CRISPR/Cas9 KOプラスミド（h2）によってコードされるgRNAは、PSPH遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  PSPH HDRプラスミド（h）および PSPH HDRプラスミド（h2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはPSPHホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のPSPH標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。