PSM CRISPR Activationプラスミド (h): sc-401947-ACT

FOLH1は、前立腺特異的膜抗原（PSMA/PSM）をコードしており、細胞外の葉酸代謝およびグルタミン酸作動性シグナル伝達を調節する、グルタミン酸カルボキシペプチダーゼ活性をもつII型膜貫通性のメタロペプチダーゼです。末梢組織では、FOLH1は葉酸ポリグルタミン酸の処理に関与し、ワンカーボン代謝やヌクレオチド生合成を支える一方、神経系ではNAALADaseとしてN-アセチルアスパルチルグルタミン酸を加水分解し、シナプスで利用可能なグルタミン酸量に影響を与えます。PSMAは腫瘍関連の新生血管や前立腺系譜の文脈でも発現するため、FOLH1の制御は、がん関連微小環境における血管新生プログラム、代謝リプログラミング、ならびに細胞表面酵素の生物学を研究するうえで重要です。これらの機能により、FOLH1は栄養利用、細胞外ペプチド処理、そしてシグナル依存的な細胞状態変化を制御する経路と結び付けられます。

PSM CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性FOLH1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PSM CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における FOLH1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はFOLH1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PSMの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のFOLH1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPSM依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびFOLH1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPSM経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。