PSGL-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422874
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PSGL-1 O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PSGL-1, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PSGL-1 Anticorpo (HECA-452): sc-53514
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PSGL-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422874 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
Selplg codifica o ligante 1 da glicoproteína da P-selectina (PSGL-1), uma sialomucina do tipo mucina expressa em leucócitos que se liga a selectinas para mediar a captura (tethering), o rolamento e a adesão firme no endotélio ativado e em plaquetas. Por meio de glicosilação regulada e sulfatação de tirosinas, a PSGL-1 integra-se a vias de adesão e à sinalização dirigida por quimiocinas para coordenar o tráfego de leucócitos, a extravasação e a formação da sinapse imune. A PSGL-1 participa de cascatas inflamatórias ao modular o recrutamento de neutrófilos, as interações monócito–endotélio e os agregados plaqueta–leucócito, conectando a inflamação vascular à ativação imune. A desregulação da função de SELPLG/PSGL-1 tem sido associada a alterações na defesa do hospedeiro e a patologias inflamatórias, o que a torna um alvo útil para estudos mecanísticos sobre migração de leucócitos e processos relacionados à imunotrombose.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PSGL-1 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Selplg em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Selplg, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Selplg na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PSGL-1.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Selplg para a investigação da sinalização de PSGL-1, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Selplg críticos para a função PSGL-1
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Selplg para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PSGL-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PSGL-1 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Selplg. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PSGL-1 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PSGL-1 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Selplg para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Selplg definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.