PSGL-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422874

Panoramica

Selplg codifica per il ligando-1 della glicoproteina P-selectina (PSGL-1), una sialomucina di tipo mucinico espressa sui leucociti che si lega alle selectine per mediare l’aggancio iniziale, il rotolamento e l’adesione stabile su endotelio e piastrine attivati. Attraverso una glicosilazione regolata e la solfatazione delle tirosine, PSGL-1 si integra con i segnali di adesione e quelli guidati dalle chemochine per coordinare il traffico leucocitario, l’extravasazione e la formazione della sinapsi immunitaria. PSGL-1 partecipa alle cascate infiammatorie modulando il reclutamento dei neutrofili, le interazioni monocita-endotelio e gli aggregati piastrina–leucocita, collegando l’infiammazione vascolare all’attivazione immunitaria. Una funzione disregolata di SELPLG/PSGL-1 è stata associata ad alterazioni della difesa dell’ospite e a patologie infiammatorie, rendendolo un bersaglio utile per studi meccanicistici sulla migrazione leucocitaria e sui processi legati all’immunotrombosi.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO PSGL-1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Selplg in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Selplg insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Selplg a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina PSGL-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Selplg per lo studio della segnalazione di PSGL-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Selplg critici per la funzione di PSGL-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Selplg per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal PSGL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal PSGL-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Selplg. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal PSGL-1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR PSGL-1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Selplg per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Selplg definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.