PRX IV Double Nickase Plasmid (h): sc-402821-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das PRX IV Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- PRX IV Double-Nickase-Plasmid (h) und PRX IV Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PRDX4 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: PRX IV: sc-376668
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
PRX IV Double Nickase Plasmid (h) | sc-402821-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PRX IV Double Nickase Plasmid (h2) | sc-402821-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane Gen **PRDX4** kodiert **Peroxiredoxin IV (PRX IV)**, eine thiolabhängige Peroxidase des endoplasmatischen Retikulums und des sekretorischen Weges, die Wasserstoffperoxid und Lipidperoxide reduziert und so die Redox-Homöostase aufrechterhält. Durch die Kopplung der Peroxidentgiftung an die Bildung von Disulfidbrücken unterstützt PRX IV die oxidative Proteinfaltung, die Proteostase im ER und die Abschwächung der Signalübertragung der Unfolded-Protein-Response unter oxidativem Stress. Die PRDX4-Aktivität überschneidet sich mit redoxregulierten Signalwegen, die Sekretion, Entzündung und Zellüberleben steuern; eine veränderte Expression oder ein veränderter Oxidationszustand wurde mit oxidativen Stressphänotypen in Verbindung gebracht, wie sie in der Krebsbiologie, bei Stoffwechselstörungen sowie in kardiovaskulären und entzündlichen Kontexten beschrieben werden. Als sezerniertes bzw. ER-lokalisiertes Redoxenzym wird PRX IV häufig hinsichtlich seines Einflusses auf die Pufferung extrazellulärer und luminaler ROS sowie der nachgeschalteten Modulation stressadaptiver transkriptioneller Programme untersucht.
PRX IV Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PRDX4-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PRDX4 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PRDX4-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PRDX4-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.