Protein S CRISPR Activation Plasmid (h): sc-401491-ACT

PROS1 kodiert das humane Protein S, ein Vitamin‑K‑abhängiges Plasmaglykoprotein, das als essenzieller Kofaktor für aktiviertes Protein C wirkt und die proteolytische Inaktivierung der Gerinnungsfaktoren Va und VIIIa fördert, wodurch die Thrombinbildung begrenzt wird. Protein S interagiert außerdem mit dem Tissue‑Factor‑Pathway‑Inhibitor und bindet in calciumabhängiger Weise an Phospholipidoberflächen, wodurch Membranbiologie mit der Kontrolle der Antikoagulation verknüpft wird. Über diese Aktivitäten ist PROS1 an der Hämostase, der vaskulären Homöostase und dem inflammatorischen Crosstalk beteiligt; veränderte Expression oder Funktion wird mit dysregulierten Gerinnungsphänotypen und einer erhöhten Thromboseanfälligkeit in Verbindung gebracht. Jenseits der Gerinnung wurde Protein‑S‑Signalgebung über TAM‑Rezeptorwege mit Efferocytose und Immunmodulation in Zusammenhang gebracht, was seine Relevanz in vaskulären und entzündungsbiologischen Forschungskontexten unterstreicht.

Protein S Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PROS1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

Protein S Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PROS1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PROS1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen Protein S-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PROS1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von Protein S-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des Protein S-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PROS1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.