Partículas Lentivirales de Activación (h) Presenilin 2: sc-403532-LAC

PSEN2 codifica la presenilina 2, un componente central catalítico del complejo γ-secretasa que media la proteólisis intramembrana de múltiples proteínas de membrana tipo I, incluidas APP y los receptores Notch. Mediante eventos de corte regulados, la presenilina 2 contribuye a la señalización de Notch, al procesamiento de APP y a efectos posteriores sobre decisiones de destino celular, la función sináptica y las respuestas inflamatorias. PSEN2 también influye en el tráfico endolisosomal, la homeostasis del calcio y la función mitocondrial, vinculando la actividad de la γ-secretasa con la proteostasis y las vías de estrés celular. Alteraciones genéticas y funcionales en PSEN2 se han asociado con mecanismos de enfermedad neurodegenerativa y neuroinflamatoria, lo que lo convierte en una diana clave para estudios centrados en vías en sistemas neuronales y gliales.

Las partículas de activación lentiviral Presenilin 2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de PSEN2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Presenilin 2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción PSEN2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Presenilin 2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo PSEN2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.