Pre-TCRα Double Nickase Plasmid (h): sc-417210-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Pre-TCRα Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Pre-TCRα Double-Nickase-Plasmid (h) und Pre-TCRα Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf PTCRA abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Pre-TCRα Double Nickase Plasmid (h) | sc-417210-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Pre-TCRα Double Nickase Plasmid (h2) | sc-417210-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTCRA kodiert die humane Prä‑T‑Zellrezeptor‑α‑Kette (pre‑TCRα), eine invariante Surrogat‑Kette, die mit TCRβ zum Prä‑TCR‑Komplex während der frühen Thymozytenentwicklung zusammenlagert. Die Signalübertragung über pre‑TCRα koordiniert die β‑Selektion und fördert das Überleben, die Proliferation und die Differenzierung von Thymozyten über Signalwege, darunter LCK/ZAP70‑getriebene Kaskaden mit nachgeschalteter MAPK/ERK‑, NF‑κB‑ und PI3K‑AKT‑Aktivität. Dieser Kontrollpunkt reguliert den allelischen Ausschluss von TCRβ und den Übergang von doppelt negativen zu doppelt positiven Stadien und prägt damit das entstehende T‑Zellrepertoire. Eine fehlregulierte PTCRA‑Expression oder Prä‑TCR‑Signalgebung wird mit veränderter lymphoider Entwicklung in Verbindung gebracht und häufig im Kontext aberranter T‑Linien‑Differenzierung sowie leukämieassoziierter Signalprogramme untersucht.
Pre-TCRα Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des PTCRA-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von PTCRA abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die PTCRA-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit PTCRA-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.