Pre-TCRα 더블 틈내기효소 플라스미드 (h): sc-417210-NIC
- Target species: human
- 20 µg of transfection-ready, purified plasmid DNA; Suitable for up to 20 transfections
- Pre-TCRα Double Nickase Plasmid (h) 는 한쌍의D10A mutated Cas9 nuclease 와 타깃특정 20 nt guide RNA (gRNA)를 인코딩하는 plasmid를 포함하고있으며 gRNA는 대응 CRISPR/Cas9 KO보다 높은 특이성을 띤 knockout gene을 발현하도록 디자인되였습니다.
- 한쌍의 gRNA는 약 20bp가량 떨어져 있으며 이는 게놈DNA의 Cas9-mediated double nicking을 발생하여 DSB를 모방합니다.
- 한쌍의 plasmid 중 하나는 selection에 필요한 puromycin-resistance gene을, 다른하나는 형질주입효율을 확인하는 GFP marker를 보유하고있습니다.
- Pre-TCRα 더블 니케이스 플라스미드 (h) 및 Pre-TCRα 더블 니케이스 플라스미드 (h2)는 PTCRA을 표적하는 서로 다른 쌍을 이루는 gRNA 설계를 암호화합니다. 하나 또는 두 가지 디자인 모두 이용 가능할 수 있습니다
주문정보
| 제품명 | 카탈로그 번호 | 단위 | 가격 | 수량 | 관심품목 | |
Pre-TCRα 더블 틈내기효소 플라스미드 (h) | sc-417210-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Pre-TCRα 더블 틈내기효소 플라스미드 (h2) | sc-417210-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTCRA는 사람의 pre–T 세포 수용체 알파(pre-TCRα)를 암호화하는 유전자로, 초기 흉선세포 발달 과정에서 TCRβ와 짝을 이루어 pre-TCR 복합체를 형성하는 불변의 대체(서로게이트) 사슬입니다. Pre-TCRα 신호는 β-선택(β-selection)을 조율하며, LCK/ZAP70에 의해 유도되는 연쇄 반응과 그 하위의 MAPK/ERK, NF-κB, PI3K-AKT 활성 등 경로를 통해 흉선세포의 생존, 증식, 분화를 촉진합니다. 이 체크포인트는 TCRβ 대립유전자 배제(allelic exclusion)와 이중음성(double-negative) 단계에서 이중양성(double-positive) 단계로의 진행을 조절하여, 형성되는 T 세포 레퍼토리를 결정짓는 데 기여합니다. PTCRA 발현 또는 pre-TCR 신호의 이상 조절은 림프계 발달 변화와 연관된 것으로 보고되어 왔으며, 비정상적인 T 계통 분화 및 백혈병 관련 신호 프로그램의 맥락에서 자주 연구됩니다.
Pre-TCRα 더블 니카제 플라스미드(h)는 human 세포주 내 PTCRA 유전자좌의 고특이성 편집을 위해 설계된 쌍을 이루는 플라스미드로 구성됩니다. 각 플라스미드는 Cas9 D10A 니카아제와 PTCRA 내의 반대 DNA 가닥을 표적으로 하는 고유한 sgRNA를 발현합니다. 반대 DNA 가닥의 인접 부위로 유도될 때, 두 니카아제는 서로 어긋난 단일 가닥 절단 부위를 생성하며, 이는 함께 엇갈린 이중 가닥 절단을 유발하여 두 가이드의 조화된 표적 활성을 필요로 합니다. 이렇게 생성된 DNA 절단은 내인성 세포 복구 경로, 특히 비동형 말단 결합(NHEJ)을 통해 해결되며, 이는 PTCRA의 기능을 방해하는 삽입 또는 결실을 초래한다. 표적 부위에서 이중 sgRNA 결합을 요구함으로써, 이중 니킹 접근법은 편집 특이성을 향상시키고 표적 정밀도에 대한 추가적인 제어가 필요한 응용을 위한 보완적인 CRISPR 전략을 제공한다.
편집된 세포를 효율적으로 식별할 수 있도록, 한 플라스미드는 형광 시각화를 위한 GFP를 발현하며, 다른 플라스미드는 항생제 선별을 위한 푸로마이신 내성 유전자를 포함하고 있습니다. 이러한 기능들은 공동 형질 도입된 세포 집단의 효율적인 농축을 지원하며, PTCRA 기능이 손상된 클론의 검증을 단순화합니다.
연구용으로만 사용하세요. 진단 또는 치료용이 아닙니다.