Plasmide CRISPR d'Activation (h) PRDM6: sc-406414-ACT

PRDM6 code un régulateur transcriptionnel contenant un domaine PR/SET, qui module l’état de la chromatine et des programmes d’expression génique liés à la spécification de la lignée des muscles lisses et à l’homéostasie vasculaire. En influençant la répression épigénétique et des réseaux transcriptionnels associés à la différenciation, PRDM6 contribue à coordonner la progression du cycle cellulaire et la commutation phénotypique dans des cellules de type muscle lisse. Une activité dérégulée de PRDM6 a été associée à des altérations du développement vasculaire et à des phénotypes de remodelage, ce qui en fait une cible pertinente pour des études de biologie cardiovasculaire et de contextes de signalisation proliférative. Sa fonction régulatrice nucléaire fait de PRDM6 un nœud utile pour disséquer le contrôle, dépendant de la chromatine, de la lignée cellulaire et de la transcription répondant au stress.

PRDM6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRDM6 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

PRDM6 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRDM6 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRDM6, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de PRDM6. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRDM6 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de PRDM6 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie PRDM6 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRDM6 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.