PRDM16 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-403464-LAC

PRDM16 codifica un regolatore trascrizionale contenente il dominio PR/SET che coordina la specificazione di linea e i programmi genici metabolici tramite attivazione e repressione trascrizionale dipendenti dal contesto. Nelle linee adipose e mesenchimali, PRDM16 è strettamente associato alla biogenesi mitocondriale, al metabolismo ossidativo e alle reti geniche termogeniche attraverso interazioni con cofattori quali i membri della famiglia PGC-1 e complessi che modificano la cromatina. Nel sistema ematopoietico, PRDM16 contribuisce al mantenimento e alla differenziazione delle cellule staminali/progenitrici, riflettendo ruoli più ampi nel controllo dello stato della cromatina e nei circuiti trascrizionali dello sviluppo. Un’espressione deregolata di PRDM16 o alterazioni strutturali sono state associate a differenziazione aberrante e a programmi trascrizionali oncogenici, a supporto del suo studio in biologia dei tumori, metabolismo e regolazione dello sviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale PRDM16 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PRDM16 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale PRDM16 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PRDM16, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di PRDM16. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PRDM16 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.