PRDM16 Plasmide Double Nickase (h): sc-403464-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- PRDM16 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il PRDM16 Double Nickase Plasmid (h) e il PRDM16 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira PRDM16. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: PRDM16 Antibody (174A2D): sc-517625
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
PRDM16 Plasmide Double Nickase (h) | sc-403464-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PRDM16 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-403464-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PRDM16 codifica un regolatore trascrizionale a dita di zinco con dominio PR/SET che integra il controllo epigenetico con programmi di espressione genica specifici di linea. È noto soprattutto per il coordinamento delle decisioni sul destino degli adipociti, inclusa l’adipogenesi bruna e beige, attraverso interazioni con co-regolatori e la modulazione di reti geniche legate al metabolismo mitocondriale e ossidativo. PRDM16 contribuisce anche agli stati trascrizionali dello sviluppo e delle cellule staminali/progenitrici, influenzando la differenziazione e l’omeostasi tissutale. Un’espressione deregolata o riarrangiamenti di PRDM16 sono stati associati a fenotipi metabolici alterati e a programmi trascrizionali oncogenici in specifici contesti ematologici, rendendolo rilevante per studi meccanicistici focalizzati su vie di segnalazione.
PRDM16 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus PRDM16 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di PRDM16. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di PRDM16. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con PRDM16 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.