Particules Lentivirales d'Activation (h) PRDM15: sc-404932-LAC

PRDM15 (PR/SET domain 15) est un régulateur transcriptionnel nucléaire contenant des domaines à doigts de zinc et apparentés à PR/SET, qui permettent une interaction avec la chromatine dépendante de séquences spécifiques et le contrôle de la transcription. Il contribue à la régulation épigénétique de programmes d’expression génique liés à l’identité cellulaire, à la prolifération et aux processus développementaux, en coordonnant des complexes associés à la chromatine au niveau des régions promotrices et enhancers. Une activité altérée de PRDM15 a été associée à des réseaux transcriptionnels dérégulés et à des états épigénomiques anormaux observés dans la biologie des cancers et les troubles du développement, ce qui en fait une cible pertinente pour étudier la spécification des lignages et les dépendances oncogéniques d’expression génique. L’étude de PRDM15 aide à définir comment des facteurs de transcription modifiant la chromatine intègrent des signaux pour façonner les réponses transcriptionnelles.

Les particules d'activation lentivirales PRDM15 (h) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de PRDM15 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales PRDM15 (h) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription PRDM15, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de PRDM15. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif PRDM15 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.