PRDM15 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404932-ACT

PRDM15（PR/SET domain 15）は、核内でクロマチンに結合する制御因子をコードしており、クロマチン状態やプロモーター活性を調節することで転写制御に関与すると考えられています。PRDMファミリーの一員として、PRDM15は増殖および分化に影響する遺伝子発現ネットワークを協調的に制御することで、系譜（ラインエージ）決定プログラムや細胞アイデンティティの維持と関連づけられています。PRDM15依存的な制御は、発生過程の転写回路を形成するエピジェネティック経路とも交差し、代謝やシグナル伝達プログラムにも影響を及ぼし得ます。PRDM15の発現や活性の異常は、がんに関連する状況で転写恒常性の変化と結び付けられており、がん性転写、幹細胞様状態、ならびにエピジェネティック脆弱性のマッピングにおける研究対象として注目されています。

PRDM15 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性PRDM15の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PRDM15 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における PRDM15 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はPRDM15転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PRDM15の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のPRDM15遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPRDM15依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびPRDM15発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPRDM15経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。