PRDM10 Double Nickaseプラスミド (h): sc-412741-NIC

PRDM10（PR domain containing 10）は、PR/SETドメインファミリーに属する核内の転写制御因子であり、クロマチン構造の制御や細胞状態の維持に関わる遺伝子発現プログラムの調整に寄与します。DNA結合パートナーやクロマチン関連複合体との相互作用を通じて、PRDM10は増殖、分化、系譜特異的な制御回路を司る転写ネットワークに影響を及ぼし得る位置づけにあります。PRDMファミリーの活性変化は、がんや発生の文脈におけるエピジェネティック制御の破綻と関連づけられており、PRDM10は転写およびクロマチン依存的な機構を研究するうえで有用な標的となります。PRDM10の機能を解析することは、ヒト細胞における遺伝子制御、エピゲノムの安定性、状況依存的な転写出力について、経路レベルでの解析を支えます。

PRDM10 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における PRDM10 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、PRDM10内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、PRDM10の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、PRDM10が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。