PRDM1/Blimp-1 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-400585-ACT

PRDM1, das für den Transkriptionsrepressor PRDM1/Blimp-1 kodiert, ist ein Masterregulator terminaler Differenzierungsprogramme im Immunsystem, einschließlich der Plasmazellbildung und der Festlegung von Effektor‑T‑Zell-Schicksalen. Es integriert Zytokin- und Antigenrezeptor-Signale, um Chromatin umzubauen und alternative Linien-spezifische Gene zu reprimieren, und koordiniert dabei Signalwege, die Proliferation, Apoptose und metabolische Anpassung steuern. Die Aktivität von PRDM1/Blimp-1 trägt außerdem zur Aufrechterhaltung gewebsresidenter Immunzustände und zur Regulation der Expression entzündungsrelevanter Gene bei. Eine fehlregulierte PRDM1-Expression oder -Funktion wird mit Immundysfunktionen und der Biologie hämatologischer Erkrankungen in Verbindung gebracht, darunter eine veränderte B‑Zell-Reifung und Transkriptionsschaltkreise in lymphomaassoziierten Kontexten.

PRDM1/Blimp-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen PRDM1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

PRDM1/Blimp-1 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des PRDM1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der PRDM1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen PRDM1/Blimp-1-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native PRDM1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von PRDM1/Blimp-1-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des PRDM1/Blimp-1-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem PRDM1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.