PRAT4A CRISPR Activationプラスミド (h): sc-404775-ACT

CNPY3は、PRAT4Aをコードしている。PRAT4Aは小胞体に局在するシャペロンであり、生合成過程における適切な折りたたみと複合体形成を促進することで、TLR4を含むトール様受容体（TLR）の成熟と輸送を支える。細胞表面における受容体の利用可能性を調節することで、PRAT4Aは自然免疫の感知機構や、NF-κBおよびIRF依存的な転写プログラムを介した下流シグナル伝達の形成に寄与する。PRAT4Aの機能が変化すると、炎症性サイトカイン応答や宿主—微生物相互作用が乱されうるため、CNPY3は免疫調節異常や炎症関連疾患の機序研究において重要である。ヒト細胞系では、PRAT4Aは小胞体の品質管理、受容体の生合成、ならびにパターン認識受容体シグナル伝達の動態という文脈で検討されることが多い。

PRAT4A CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性CNPY3の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PRAT4A CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における CNPY3 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はCNPY3転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PRAT4Aの発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のCNPY3遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPRAT4A依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびCNPY3発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPRAT4A経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。