PPP1R6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406901

Visão geral

PPP1R3D codifica a subunidade regulatória PPP1R6, um adaptador direcionado ao glicogênio que orienta a proteína fosfatase 1 (PP1) para substratos envolvidos no armazenamento de carboidratos e na homeostase energética. Ao modular a localização da PP1 e seu acesso catalítico, a PPP1R6 pode influenciar o estado de fosforilação de enzimas do metabolismo do glicogênio e, assim, moldar a síntese e a mobilização de glicogênio em células humanas. Esse nó regulatório se cruza com redes de sinalização de detecção de nutrientes e de quinases/fosfatases que coordenam o fluxo metabólico, as condições de crescimento celular e as respostas ao estresse. A desregulação do manejo do glicogênio e da sinalização por fosfatases é uma característica recorrente de patologias metabólicas e proliferativas, tornando a PPP1R6 um ponto de entrada útil para estudos mecanísticos de fosforregulação em contextos relevantes para doenças.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PPP1R6 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene PPP1R3D em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do PPP1R3D, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do PPP1R3D na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PPP1R6.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de PPP1R3D para a investigação da sinalização de PPP1R6, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) PPP1R3D críticos para a função PPP1R6
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos PPP1R3D para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PPP1R6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo PPP1R6 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus PPP1R3D. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PPP1R6 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR PPP1R6 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia PPP1R3D para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo PPP1R3D definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.