PPARγ Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-400030-ACT

PPARG codifica il recettore gamma attivato dai proliferatori dei perossisomi (PPARγ), un recettore nucleare attivato da ligandi che coordina programmi trascrizionali coinvolti nel controllo dell’adipogenesi, della captazione e dell’accumulo di lipidi, della sensibilità all’insulina e della segnalazione antinfiammatoria. PPARγ forma un eterodimero con RXR e si lega agli elementi di risposta ai PPAR per regolare reti di geni metabolici nel tessuto adiposo, nei macrofagi e in altri tipi cellulari. Integra segnali provenienti da acidi grassi ed eicosanoidi per modulare vie che includono l’omeostasi del glucosio, la funzione mitocondriale e la produzione di citochine. Un’attività deregolata di PPARG è stata implicata nella sindrome metabolica, nel diabete di tipo 2, nella steatosi epatica non alcolica, nell’aterosclerosi e, in modo dipendente dal contesto, in ruoli nella differenziazione delle cellule tumorali e nella biologia del microambiente tumorale.

PPARγ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di PPARG senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

PPARγ Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus PPARG nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione PPARG, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di PPARγ. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus PPARG nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da PPARγ nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via PPARγ nelle cellule tumorali con espressione di PPARG silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.