PP2B-B2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422387

Visão geral

Ppp3r2 codifica a subunidade regulatória B2 da calcineurina (PP2B), uma fosfatase de serina/treonina dependente de Ca2+/calmodulina que ajusta a amplitude do sinal e a especificidade por substratos em resposta ao fluxo intracelular de cálcio. A PP2B-B2 participa de programas de desfosforilação induzidos por Ca2+ que controlam respostas transcricionais, como a sinalização de NFAT, bem como a plasticidade sináptica, a remodelação do citoesqueleto e outros processos sensíveis ao cálcio. Ao moldar os estados de fosforilação em diversos alvos, a PPP3R2 influencia a adaptação celular à estimulação em tecidos excitáveis e não excitáveis. A desregulação da sinalização da calcineurina tem sido implicada em vias imunes e inflamatórias e em fenótipos neurológicos ligados à homeostase alterada do cálcio, tornando a PPP3R2 um nó útil para estudos mecanísticos desses processos.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PP2B-B2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ppp3r2 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ppp3r2, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ppp3r2 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PP2B-B2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ppp3r2 para a investigação da sinalização de PP2B-B2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ppp3r2 críticos para a função PP2B-B2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ppp3r2 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo PP2B-B2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PP2B-B2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ppp3r2. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo PP2B-B2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PP2B-B2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ppp3r2 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ppp3r2 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.