PP2A-B56-γCRISPR激活质粒(h): sc-402726-ACT

PPP2R5C 编码蛋白磷酸酶 2A（PP2A）的 B56γ 调节亚基。PP2A 是主要的丝氨酸/苏氨酸磷酸酶之一，可将其催化活性导向特定底物和亚细胞定位。PP2A‑B56γ 通过协调关键调控因子的去磷酸化，参与调控细胞周期进程、DNA 损伤信号传导、有丝分裂检查点的准确性，以及 PI3K–AKT、MAPK、Wnt/β‑catenin 等通路的信号转导。PPP2R5C 表达变化或 PP2A 全酶复合体组成改变，可能重塑磷酸化网络，从而影响细胞增殖、基因组稳定性与应激反应。这些特性使 PP2A‑B56γ 成为研究“由磷酸酶引导的通路隔离（insulation）”以及去磷酸化失调如何关联疾病相关表型机制的关键节点。

PP2A-B56-γ CRISPR激活质粒（h）提供了一种靶向、非破坏性的方法，可在不改变底层DNA序列的情况下上调内源性PPP2R5C的表达。

PP2A-B56-γ CRISPR激活质粒（h）是一个由三条质粒组成的协同激活介导（SAM）系统，旨在对人类细胞系中的PPP2R5C基因座进行高效、位点特异性的转录上调。该系统以一种携带两个失活突变（D10A 和 N863A）的无催化活性的 Cas9（dCas9）为核心，这些突变消除了核酸酶活性，同时保留了 DNA 结合能力。该 dCas9 与强效转录激活因子 VP64 融合，并与用于筛选的布拉西定抗性基因共同表达。第二个质粒编码MS2-p65-HSF1融合蛋白——这一二级激活复合物与dCas9-VP64协同作用，并携带潮霉素抗性基因。第三个质粒编码靶标特异性20 nt sgRNA，其与两个MS2 RNA适配体融合，这些适配体可将MS2-p65-HSF1复合物招募至激活位点，并携带嘌呤霉素抗性基因。这三个质粒按1:1:1的质量比递送，以确保系统所有组分的平衡表达。

在靶位点组装完成后，SAM复合物结合于PPP2R5C转录起始位点上游约200 bp处，VP64、p65和HSF1在此协同作用，招募转录 machinery并驱动内源性PP2A-B56-γ表达上调。与具有核酸酶活性的Cas9不同， dCas9不会引入双链断裂或修改基因组序列，从而保留了原生的PPP2R5C位点，并能够研究内源性位点上依赖于PP2A-B56-γ的转录反应，使其成为功能研究、靶基因鉴定以及在PPP2R5C表达被沉默或降低的肿瘤细胞中模拟PP2A-B56-γ通路恢复的宝贵工具。

仅供研究使用。不用于诊断或治疗。