PNGase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425553
- alvos específicos: mouse
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PNGase O Plasmídeo CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) é um conjunto de plasmídeos, cada um codificando a nuclease Cas9 e um RNA guia (gRNA) de 20 nt específico para o alvo, concebido para uma eficiência máxima de knockout utilizando sequências derivadas da biblioteca GeCKO v2
- As sequências de gRNA direcionam a Cas9 para induzir quebras de cadeia dupla (DSBs) específicas do local no locus genómico PNGase, resultando no knockout do gene através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ)
- Os genes de resistência à puromicina e RFP são flanqueados por sítios LoxP, permitindo a remoção de marcadores de seleção através da recombinase Cre (Cre Vector: sc-418923) após o estabelecimento de linhas celulares knockout estáveis
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PNGase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-425553 | 20 µg | $397.00 |
Visão geral
O Ngly1 de camundongo codifica a peptide:N-glicanase (PNGase), uma enzima citosólica de desglicosilação que remove glicanos N-ligados de glicoproteínas mal dobradas retrotranslocadas do retículo endoplasmático. Essa atividade é parte integrante da degradação associada ao RE (ERAD), acoplando a desglicosilação à degradação pelo sistema ubiquitina–proteassoma e modulando a proteostase sob estresse da resposta a proteínas mal dobradas. O NGLY1 também participa da regulação do processamento de NRF1/NFE2L1, conectando a desglicosilação a programas de adaptação celular que controlam a expressão de genes do proteassoma e a resiliência ao estresse. A disrupção da função de N-glicanase é amplamente relevante para mecanismos de estresse proteotóxico, controle de qualidade proteica e fenótipos do neurodesenvolvimento observados na biologia relacionada ao NGLY1.
O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO PNGase (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Ngly1 em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Ngly1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.
O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Ngly1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína PNGase.
Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Ngly1 para a investigação da sinalização de PNGase, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.
Características principais
- sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Ngly1 críticos para a função PNGase
Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
Repórter GFP para identificação de células transfectadas
Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Ngly1 para melhorar a eficiência do knockout
Compatível com administração por transfecção
Variantes de Design
CRISPRs +/- HDRs
- Os gRNAs codificados pelo PNGase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo PNGase Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Ngly1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
As construções doadoras HDR codificadas pelo PNGase Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR PNGase (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Ngly1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Ngly1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.