PMCA3 Plasmídeo duplo de Nickase (h): sc-404464-NIC
- alvos específicos: human
- 20 µg de plasmídeo de DNA pronto para transfecção; Suficiente para até 20 transfecções
- PMCA3O plasmídeo de dupla Nickase (h) consiste num par de plasmídeos cada um contem D10A com mutação na nuclease Cas9 nuclease e um alvo especifico de RNA guia com 20 na (gRNA), criado para nocautear a expressão genética com maior especificidade do que o seu correspondente CRISPR/Cas9 KO
- Sequencias pareadas de gRNA são de aproximadamente 20 bp para permitir que os cortes duplos no DNA genômico mediados pela Casp ocorram com especificidade , o que se assemelha ao corte pela DSB
- Cada plasmídeo pertencente ao par de plasmídeos contem um gene de resistência a puromicina para seleção; o outro plasmídeo do par contem um marcador de GFP para a visualização e confirmação da transfecção
- O Plasmídeo Double Nickase PMCA3 (h) e o Plasmídeo Double Nickase PMCA3 (h2) codificam designs distintos de pares de gRNA direcionados para ATP2B3. Um ou ambos os desenhos podem estar disponíveis
- Após a transfecção, a eficácia do processo de nocaute genético por ser testada WB, IF ou IHC usando o anticorpo:PMCA3 Anticorpo (G-6): sc-390148
Informacoes sobre ordens
| Nome do Produto | Numero de Catalogo | UNID | Preco | Qde | FAVORITOS | |
PMCA3 Plasmídeo duplo de Nickase (h) | sc-404464-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
PMCA3 Plasmídeo duplo de Nickase (h2) | sc-404464-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
O ATP2B3 humano codifica a ATPase transportadora de Ca2+ 3 da membrana plasmática (PMCA3), uma ATPase do tipo P que exporta Ca2+ citosólico para manter baixos níveis basais de cálcio e moldar transientes de Ca2+ evocados por estímulos. Ao restaurar a homeostase de Ca2+ após eventos de sinalização, a PMCA3 ajuda a regular processos dependentes de cálcio, incluindo excitabilidade, secreção, respostas transcricionais e vias de sobrevivência celular. A atividade da PMCA3 se integra funcionalmente à regulação por calmodulina e a redes mais amplas de sinalização de Ca2+, como as vias de calcineurina/NFAT e mediadas por CaMK. A desregulação genética ou a expressão alterada de ATP2B3 tem sido associada a fenótipos neurodesenvolvimentais e neurológicos, sustentando sua relevância para estudos mecanísticos de defeitos no manejo de cálcio.
PMCA3 O Plasmídeo de Nickase Dupla (h) consiste num par de plasmídeos combinados, concebidos para a edição de alta especificidade do locus ATP2B3 em linhas celulares human. Cada plasmídeo expressa uma nickase Cas9 D10A e um sgRNA distinto que tem como alvo cadeias de ADN opostas dentro de ATP2B3. Quando direcionadas para locais adjacentes em cadeias de ADN opostas, as duas nickases geram cortes deslocados numa única cadeia que, em conjunto, produzem uma quebra escalonada de cadeia dupla, exigindo uma atividade coordenada no alvo por parte de ambas as guias. A quebra de ADN resultante é resolvida por vias de reparação celular endógenas, mais frequentemente através da junção de extremidades não homólogas (NHEJ), levando a inserções ou deleções que perturbam a função ATP2B3. Ao exigir o envolvimento de dois sgRNA no locus alvo, a abordagem de dupla nickase aumenta a especificidade da edição e fornece uma estratégia CRISPR complementar para aplicações em que se deseja um controlo adicional sobre a precisão do direcionamento.
Para apoiar a identificação eficiente das células editadas, um plasmídeo codifica GFP para visualização fluorescente das populações transfectadas, enquanto o plasmídeo complementar transporta um gene de resistência à puromicina para seleção antibiótica. Em conjunto, estas características apoiam o enriquecimento eficiente das populações co-transfectadas e simplificam a validação dos clones com ATP2B3 interrompido.
Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.