PMCA1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-402691-ACT

ATP2B1は、ヒトの形質膜Ca2+-ATPase 1（PMCA1）をコードしており、シグナル伝達後に細胞質内カルシウム濃度を低い状態へ戻す高親和性のCa2+排出ポンプである。PMCA1はCa2+を細胞外へ排出することで、膜興奮性、分泌、細胞骨格ダイナミクス、転写プログラムを制御するCa2+依存性経路の振幅と持続時間を調節する。PMCA1の活性は、カルモジュリン依存的な制御や、CaMKおよびカルシニューリン／NFATなどの下流エフェクターと連動して、細胞内Ca2+恒常性の維持に寄与する。ATP2B1が関与するカルシウム制御の破綻は、遺伝学的研究および機能解析により心血管系・神経生物学的な表現型と関連づけられており、カルシウム駆動性の疾患プロセスに関する機序研究における重要性が示唆されている。

PMCA1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性ATP2B1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

PMCA1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における ATP2B1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はATP2B1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性PMCA1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のATP2B1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるPMCA1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびATP2B1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるPMCA1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。